采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法见本文所介绍的常用的两种.

实验所需仪器：电泳槽，混合仪，离心机

采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法如下:

（1）凝胶制备：

制备1.2%琼脂糖凝胶（电泳槽体积为50ml）

① 称取0.6g琼脂糖,加入43.5ml水,加热溶解并降温到60℃.

② 加入5ml 10×甲醛变性电泳缓冲液,并加入1.5ml 37%的甲醛,混合均匀.

③ 倒入电泳槽中制胶（甲醛有毒,制胶应在通风橱中进行）.

（2）RNA模板准备（5~7.5μg total RNA）：

① 制备如下混合液 （9.7μl）

       10×甲醛变性电泳缓冲液：    1.25μl

       37%的甲醛：                 2.2μl

       甲酰胺：                    6.25μl

② 加入2.8μl RNA,使总体积达到12.5μl

③ 混合后离心5~10 sec（1 000~2 000 r/min）

④ 55℃加热15 min

⑤ 加入2.5μl甲醛凝胶加样缓冲液,再加点EB（约0.2~0.5μl）,混合后离心5 sec

⑥ 将样品加入点样孔

⑦ 在5v/cm的电压下电泳至溴酚蓝带跑到电泳槽中央（20cm长电泳槽,用95v电压,1小时左右）