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用煮沸法来做大肠杆菌质粒DNA的提取实验

添加日期:2014年11月19日 关键字: 点击次数:555 次

导读:

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

实验材料:大肠杆菌细胞

试剂、试剂盒:溶菌酶

仪器、耗材:eppendorf管,卫生纸,STET溶液,水浴锅电泳仪离心机混匀仪

实验步骤:

1、将1.5 ml培养液倒入eppendorf管中,4 ℃下12000g离心30秒。

2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。

3、将菌体沉淀悬浮于120 ml STET溶液中, 涡旋混匀。

4、加入10 ml新配制的溶菌酶溶液(10 mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。

5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

6、用微量离心机4 ℃下12000 g离心10分钟。

7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。

8、取20 ml进行电泳检查。

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