| 添加日期：2014年10月28日 | 关键字： | 点击次数：536 次 |
化学法
实验方法原理：本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。
实验材料：酵母菌
试剂、试剂盒：YPD培养基，酵母化学感受态细胞制备试剂盒
实验步骤：
1、挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50 mL 离心管中的10 mL的自备的YPD培养基中。
2、30℃摇晃培养，摇床速度250 rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0（相当于0.6-1×107细胞/mL）。
3、室温3 000 rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4、新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：将4.75 mL制备液A、0.25 mL制备液B和0.25 mL制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5、用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对10 mL酵母则需要5 mL酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡1分钟，室温3 000 rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6、再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对10 mL酵母，则需要0.2 mL酵母感受态制备工作液）。
7、按每管0.2 mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受态细胞足够1次转化使用。
试剂盒制备法
实验方法原理：本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。
实验材料：酵母菌
试剂、试剂盒：YPD培养基，酵母化学感受态细胞制备试剂盒
实验步骤：
1、挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50 mL 离心管中的10 mL的自备的YPD培养基中。
2、30℃摇晃培养，摇床速度250 rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0（相当于0.6-1×107细胞/mL）。
3、室温3 000 rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4、新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：将4.75 mL制备液A、0.25 mL制备液B和0.25 mL制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5、用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对10 mL酵母则需要5 mL酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡1分钟，室温3 000 rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6、再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对10 mL酵母，则需要0.2 mL酵母感受态制备工作液）。
7、按每管0.2 mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受态细胞足够1次转化使用。
注意事项：
1. 放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。
