根据细胞生长的恃点，传代方法有3种：悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代、贴壁生长细胞传代。

　　实验方法：细胞培养技术消化法

　　实验方法原理:培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。

　　实验材料：细胞，试剂、试剂盒，D-Hanks液，小牛血清，RPMI1640，双抗，胰蛋白酶，EDTA NHCl NaHCO3

　　仪器、耗材：

　　净化工作台，离心机，恒温水浴箱，冰箱，倒置相差显微镜，培养箱，吸管，玻璃瓶，培养瓶，废液缸，吸头，枪头，胶塞 ，离心管，量加样枪，红血球计数板

　　实验步骤：

　　1. 贴壁细胞的消化法传代：

　　吸除或倒掉瓶内旧培养液。

　　D-Hanks液洗2～3次。

　　轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面。

　　消化最好在37℃或室温25℃以上环境下进行。

　　消化2～5 min 后把培养瓶放置显微镜下进行观察，发现胞质回缩，细胞间隙增大后，应立即终止消化。

　　吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶把残留消化液冲掉。

　　再加培养液。如仅用胰蛋白酶可直接加少许含血清的培养液，终止消化。

　　用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行。

　　从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到，使细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔不要用力过猛。

　　计数，分别接种在新的培养瓶内。

　　2. 悬浮细胞的传代：悬浮细胞传代可离心收集细胞后传代，或直接传代。

　　离心传代法：

　　将细胞连同培养液一并转移到15 ml 离心管内。

　　离心800~1000 rpm，5 min。

　　弃去上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打形成细胞悬液。

　　计数，分别接种在新的培养瓶内。

　　直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清液吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成细胞悬液后再传代。

　　3. 部分贴壁细胞的传代

　　部分贴壁不牢的细胞，如Hela细胞等，不经消化处理直接吹打可使细胞从壁上脱落下来，而进行传代。

　　对绝大部分贴壁生长的细胞，因直接吹打对细胞损伤较大，细胞常有较大数量的丢失，因而需消化后，才能吹打传代。

　　注意事项：

　　1. 胰蛋白酶要预温，温度37℃左右为宜℃。

　　2. 离心转速要合适，转速过低，不能有效分离细胞，离心速度过大，时间过长，会挤压细胞造成损伤甚至死亡。

　　3. 要定时观察细胞，发现污染，应及时处理。