液氮超低温保存技术是将菌种保存在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。

操作步骤如下：

1.冷冻前的准备

准备圆底硼硅玻璃制品的安瓿管，不能有裂纹，或螺旋口的塑料冻存管。将冻存管或安瓿管清洗干净，高压灭菌15-20分钟。根据微生物类别准备保护剂。配制保护剂时，应注意浓度。

菌种的准备：

刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内；接种液体培养基，振荡培养后取菌悬液与保护剂混合分装于冻存管内；将培养物在平皿培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板上切取一些大小均匀的小块(直径约5-10毫米)，真菌最好取菌落边缘的菌块，与保护剂混匀后加入冻存管内。在小安瓿管中装1.2-2毫升的琼脂培养基，接种菌种，培养2-10天后，

加入保护剂，待保藏。微生物一般使用静止期或成熟期培养物，分装在无菌条件下操作。

2.预冻

预冻时一般冷冻速度控制在以每分钟下降1℃为好、使样品冻结到-35℃。

目前常用的有三种控温方法：

程序控温降温法，应用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温，能很好地控制降温速率。分段降温法，将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或悬挂于冰的气雾中逐渐降温。一般采用二步控温，将安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小时，然后取出放入液氮罐中快速冷冻。这样冷冻速率大约每分钟下降1-1.5℃。对耐低温的微生物、可以直接放入气相或液相氮中。

3.保藏

将安瓿管或塑料冻存管置于-196℃液氮罐中保藏。

4.复苏方法

从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的微生物培养基上进行培养。 

青岛海尔液氮罐：http://www.njgc17.com/productlist_795_b3.html

查特生物医疗（成都金凤）液氮罐：http://www.njgc17.com/productlist_795_b11.html